聚丙烯酰胺凝膠電泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis, PAGE）

支持介質(zhì)：丙烯酰胺（Acr）與交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺（Bis）聚合形成的凝膠，孔徑可通過調(diào)整 Acr/Bis 比例控制（5%-20% 凝膠對(duì)應(yīng)不同孔徑）。

核心特點(diǎn)：孔徑?。?-10nm）、分辨率（可區(qū)分分子量相差 1kDa 的蛋白質(zhì)）、重復(fù)性好。

適用對(duì)象：小分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、小分子 DNA（＜1kb）、RNA。

關(guān)鍵分支：

SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉 - PAGE）：常用的蛋白質(zhì)分析技術(shù)。SDS 是陰離子去污劑，可使蛋白質(zhì)變性并結(jié)合等量 SDS（每克蛋白質(zhì)結(jié)合 1.4g SDS），消除蛋白質(zhì)自身電荷差異，僅通過分子大小實(shí)現(xiàn)分離，可用于蛋白質(zhì)分子量測(cè)定、純度鑒定。

Native-PAGE（非變性 PAGE）：不添加 SDS 和還原劑，蛋白質(zhì)保持天然構(gòu)象和電荷，分離依賴 “電荷 + 大小 + 形狀”，可用于分析蛋白質(zhì)活性、復(fù)合物組成。

典型操作流程（以 SDS-PAGE 為例）

凝膠制備：根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)分子量配置凝膠（小分子用高濃度膠，如 15%；大分子用低濃度膠，如 8%），分為 “分離膠”（下層，起分離作用）和 “濃縮膠”（上層，使樣品濃縮成窄帶，提高分辨率）。

樣品處理：蛋白質(zhì)樣品與 SDS 上樣緩沖液（含 SDS、還原劑 β- 巰基乙醇、溴酚藍(lán)指示劑）混合，95℃加熱 5-10 分鐘，使蛋白質(zhì)變性并結(jié)合 SDS。

上樣與電泳：將處理好的樣品加入凝膠加樣孔，同時(shí)加入 “蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)品”（Marker），接通電源（濃縮膠用低電壓，分離膠用高電壓），溴酚藍(lán)指示劑遷移至凝膠底部時(shí)停止電泳。

檢測(cè)與分析：

染色：常用考馬斯亮藍(lán)染色（簡(jiǎn)單快速，檢測(cè)限～0.1μg）或銀染（靈敏度高，檢測(cè)限～1ng）；

成像與分析：通過凝膠成像儀拍攝條帶，結(jié)合 Marker 判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子量，通過條帶亮度半定量分析蛋白質(zhì)含量。

后處理（保證涂層性能穩(wěn)定）

烘干固化：將工件放入高溫烘箱，按涂料要求控制溫度（陰極電泳 160-180℃，陽極電泳 140-160℃）和時(shí)間（20-40 分鐘），使涂層交聯(lián)固化，形成終的機(jī)械性能和耐腐蝕性（固化參數(shù)直接影響涂層硬度、附著力）。

冷卻檢驗(yàn)：工件自然冷卻后，檢測(cè)涂層外觀（無流掛、針孔、色差）、厚度（用膜厚儀測(cè)量）、附著力（劃格法測(cè)試，需達(dá)到 GB/T 9286 標(biāo)準(zhǔn) 0 級(jí)或 1 級(jí)）、耐腐蝕性（鹽霧測(cè)試、耐溶劑測(cè)試）。

純水洗

目的：用去離子水（電導(dǎo)率＜10μS/cm）終清洗，徹底去除工件表面的離子雜質(zhì)（如鈣、鎂離子）。

工藝：浸泡或噴淋，時(shí)間 1-2 分鐘，防止后續(xù)電泳時(shí)產(chǎn)生針孔、縮孔等缺陷。

烘干

目的：去除工件表面的水分，避免電泳時(shí)水分帶入槽液導(dǎo)致涂層出現(xiàn)氣泡。

工藝：在 80-120℃烘箱中烘干，時(shí)間 15-30 分鐘（根據(jù)工件大小調(diào)整），確保表面完全干燥。